In vitro evaluation of ivermectin, moxidectin, albendazole and pyrantel against cyathostomins of horses / Avaliação in vitro da ivermectina, moxidectina, albendazole e pirantel contra ciatostomíneos de equinos

Abstract Cyathostomins are the most prevalent nematodes of horses, and multidrug resistance has been reported worldwide. There is a need to implement alternative drug monitoring analytical tests. The objective of this study was to determine the consistency (5 repetitions) of the larval migration on agar test (LMAT) using ivermectin, moxidectin, pyrantel or albendazole against cyathostomin infective-stage larvae in eight different concentrations. LMAT showed a strong coefficient of determination (R2 > 0.91), between the test repetitions (n=5). The average 50% effective concentration (EC50) for ivermectin, moxidectin, pyrantel and albendazole were 0.0404, 0.0558, 0.0864 and 0.0988 nMol, respectively. The results of the EC50 for albendazole showed the greatest range of concentration. Ivermectin and moxidectin had the lowest in between-test variation. In the future, internationally certified susceptible isolates could be used for screening new drug candidates, or to follow up the pattern of drug efficacy from field populations.

Resumo Ciatostomíneos são os nematodas mais prevalentes em equinos e a resistência múltipla foi relatada em todo o mundo. Existe a necessidade de implementar o monitoramento dos produtos com testes analíticos alternativos. O objetivo deste estudo foi determinar a consistência (5 repetições) do teste de migração larval em ágar (TMLA) usando ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole contra larvas infectantes de ciatostomíneos em oito concentrações diferentes. O TMLA demonstrou um coeficiente de determinação (R2) acima de 0,91 entre as repetições do teste. A concentração efetiva para 50% (CE50) para ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole foi de 0,0404; 0,0558; 0,0864 e 0,0988 nMol, respectivamente. A CE50 do albendazole demonstrou a maior amplitude entre os testes. A ivermectina e a moxidectina tiveram as menores variações das doses entre as repetições. No futuro, isolados certificados susceptíveis poderão ser testados com o TMLA para indicação de novos produtos e mesmo para acompanhar o perfil de eficácia de populações do campo.

In vitro evaluation of ivermectin, moxidectin, albendazole and pyrantel against cyathostomins of horses

Abstract Cyathostomins are the most prevalent nematodes of horses, and multidrug resistance has been reported worldwide. There is a need to implement alternative drug monitoring analytical tests. The objective of this study was to determine the consistency (5 repetitions) of the larval migration on agar test (LMAT) using ivermectin, moxidectin, pyrantel or albendazole against cyathostomin infective-stage larvae in eight different concentrations. LMAT showed a strong coefficient of determination (R2 > 0.91), between the test repetitions (n=5). The average 50% effective concentration (EC50) for ivermectin, moxidectin, pyrantel and albendazole were 0.0404, 0.0558, 0.0864 and 0.0988 nMol, respectively. The results of the EC50 for albendazole showed the greatest range of concentration. Ivermectin and moxidectin had the lowest in between-test variation. In the future, internationally certified susceptible isolates could be used for screening new drug candidates, or to follow up the pattern of drug efficacy from field populations.

Resumo Ciatostomíneos são os nematodas mais prevalentes em equinos e a resistência múltipla foi relatada em todo o mundo. Existe a necessidade de implementar o monitoramento dos produtos com testes analíticos alternativos. O objetivo deste estudo foi determinar a consistência (5 repetições) do teste de migração larval em ágar (TMLA) usando ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole contra larvas infectantes de ciatostomíneos em oito concentrações diferentes. O TMLA demonstrou um coeficiente de determinação (R2) acima de 0,91 entre as repetições do teste. A concentração efetiva para 50% (CE50) para ivermectina, moxidectina, pirantel e albendazole foi de 0,0404; 0,0558; 0,0864 e 0,0988 nMol, respectivamente. A CE50 do albendazole demonstrou a maior amplitude entre os testes. A ivermectina e a moxidectina tiveram as menores variações das doses entre as repetições. No futuro, isolados certificados susceptíveis poderão ser testados com o TMLA para indicação de novos produtos e mesmo para acompanhar o perfil de eficácia de populações do campo.

Susceptibility of Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) to pyrethroids and their associations in Pernambuco, Brazil / Susceptibilidade de Rhipicephalus (Boophilus) microplus (Acari: Ixodidae) a piretróides e suas associações em Pernambuco, Brasil

The synthetic pyrethroids and their associations have been widely used for controlling Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The frequent use of acaricides has been inducing the development of resistance in the tick populations. The aim of this study was to assess the susceptibility of R. (B.) microplus populations to pyrethroids and their associations in the region of Garanhuns, Pernambuco, Brazil. In addition, the level of information among farm owners regarding tick control measures was investigated. Ticks were collected directly from naturally infested dairy cattle in the region and were exposed to pyrethroids and their associations. At the same time, an epidemiological questionnaire was applied with the aim of investigating the level of information among the farmers. The results reported here indicate that R. (B.) microplus populations in the dairy region of Garanhuns show resistance to pyrethroids and their associations, except when the product is associated with piperonyl butoxide. Regarding the results from the epidemiological survey, it was seen that there is a considerable lack of information among the farmers in relation to ixodid control measures. The level of ticks resistance to acaricides varied widely across the region studied. No alternative control programs have been implemented among these farms, thus demonstrating that there is a need for more information relating to the biology and control of R. (B.) microplus.

Os piretróides sintéticos e associações são acaricidas amplamente utilizados para o controle do Rhipicephalus (Boophilus) microplus. O uso frequente destes fármacos tem induzido o surgimento de populações de carrapatos resistentes. Objetivou-se neste estudo avaliar a susceptibilidade de populações de R. (B.) microplus aos piretróides e associações. Além disso, investigou-se o nível de informações dos proprietários com relação ás medidas de controle utilizadas. Os carrapatos foram coletados diretamente de bovinos naturalmente infestados na região leiteira de Garanhuns, Pernambuco e expostos a piretróides e suas associações. Contemporaneamente, foi aplicado um questionário epidemiológico com o objetivo de avaliar o nível de informação dos produtores. Os resultados aqui obtidos demonstram que populações de R. (B.) microplus provenientes da região leiteira de Garanhuns apresentam resistência aos piretróides, exceto quando o produto está associado com butóxido de piperonila. Em se tratando dos resultados referentes ao inquérito epidemiológico, verificou-se considerável falta de informação por parte dos produtores com relação ás medidas de controle de ixodídeos. Assim, verifica-se que o nível de resistência aos acaricidas é muito variável na região estudada e que não há, nas propriedades, a adoção de programas alternativos de controle, demonstrando a necessidade de maiores informações relacionadas á biologia e ao controle do R. (B.) microplus.

Teste in vitro do efeito acaricida do óleo essencial de Melaleuca alternifolia sobre Otodectes cynotis In vitro test of the acaricide effect of the Melaleuca alternifolia essential oil on Otodectes cynotis

A otocariose é uma doença parasitária causada pelo ácaro Otodectes cynotis, sendo frequentemente observado no ouvido de cães e gatos, como um dos principais causadores de otite externa. Para o tratamento da otocariose é necessário o uso de substâncias acaricidas. No entanto é crescente o número de relatos sobre a resistência parasitária, sendo este um motivo de preocupação por parte de clínicos e proprietários. Este trabalho teve por objetivo testar o efeito acaricida, in vitro, do óleo essencial de melaleuca (Melaleuca alternifolia) contra o ácaro Otodectes cynotis. Foram selecionados ácaros coletados do conduto auditivo de cães, tendo como critério a integridade estrutural e a ativa movimentação.  Estes ácaros foram mantidos em placas de Petri e distribuídos em três grupos, correspondendo a três tratamentos diferentes: loção a 5% de óleo essencial de melaleuca; loção a 5% de tiabendazol e loção não-iônica, veículo utilizado nas duas loções anteriores. Foram realizados exames com intervalos regulares de uma hora após o início do experimento, até o total de 5 horas, utilizando a motilidade e integridade estrutural como parâmetros de avaliação. O óleo essencial de melaleuca apresentou propriedade acaricida, in vitro, desde a primeira hora de tratamento, podendo vir a ser uma opção de tratamento eficiente para a otocariose.

Concentração de lactato de cálcio e tempo de incubação sobre a capacidade de adesão e penetração de espermatozoides suínos na membrana perivitelina do ovo da galinha / Calcium lactate concentration and incubation period on the binding and penetration capacity of swine sperm in the perivitelline membrane of chicken egg

Este estudo testou o efeito de diferentes concentrações de lactato de cálcio e tempos de incubação sobre a capacidade de adesão e a penetração dos espermatozoides suínos nas membranas perivitelinas (MP) de ovos de galinhas, na expectativa de desenvolver um teste para estimar o potencial de fertilidade de machos doadores de sêmen. No primeiro experimento, amostras de sêmen (n=12) foram incubadas em meio TCM com lactato de cálcio a 1,1 e 2,2µg mL-1. Posteriormente, após definida a concentração de 1,1µg mL-1 de lactato de cálcio, um segundo experimento comparou três períodos de incubação a 39°C: 10, 15 e 20min. As respostas testadas foram: a taxa de adesão (TA) e o número de espermatozoides aderidos (NA) na MP externa, e a taxa de penetração (TP) e o número de orifícios (NO) na MP interna. A TA na MP externa foi de 100 por cento, independentemente da concentração e dos períodos testados. Com a concentração de lactato de cálcio de 1,1µg mL-1, o NA na membrana perivitelina externa e TP e NO na membrana perivitelina interna foram superiores (P<0,05) aos com 2,2µg mL-1. O NA foi superior com incubação por 20min, em comparação aos períodos mais curtos (P<0,05). No período de incubação por 10min, não houve penetração na MP interna. Porém, com 20min de incubação, a TP na MP interna e o NO foram superiores aos obtidos com a incubação por 15min (P<0,05). A concentração de 1,1µg mL-1 de lactato de cálcio e o perídodo de incubação por 20min permitem a execução eficiente de testes in vitro usando MP para verificar etapas importantes do processo de fertilização.

This study tested the effect of different calcium lactate concentrations and incubation periods on the binding and penetration capacity of swine sperm to the perivitelline layers (PL) of chicken eggs, with the expectation of developing a test to estimate the potential fertility of boars used as sperm donors. In the first experiment, semen samples (n=12) were incubated with TCM medium ant two calcium lactate levels: 1.1 and 2.2µg mL-1. After the set up of fixed calcium lactate level (1.1µg mL-1), the second experiment compared three incubation periods: 10, 15 and 20min. The observed variables were binding rate (BR) and number of bound sperm (NB) in the outer PL, and penetration rate (PR) and number of holes (NH) in the inner PL. The BR to the outer MP was 100 percent, regardless of the tested concentrations and incubation periods. The NB to the outer perivitelline layer and the PR and the NH in the inner perivitelline layer were greater with 1.1µg mL-1 calcium lactate than 2.2µg mL-1. The NB in the outer PL was greater with 20min incubation than with shorter period (P<0.05). Using 10min incubation, there was no penetration in the inner PL, but, with incubation for 20min, the PR and the NH in the inner PL were greater than those with incubation for 15 min (P<0.05). Using 1.1µg mL-1 calcium lactate and incubation for 20min, the in vitro test using PL can be efficiently conducted to assess important steps of the fertilization process.

Proposta para teste carrapaticida por imersão de larvas de Rhipicephalus (Boophilus) microplus: avaliação em cipermetrina e amitraz / Proposal of an acaricide laboratory test larvae immersion of Rhipicephalus (Boophilus) microplus: evaluation with cypermethrin and amitraz

The aim of this work was to develop a technique of acaricides evaluation by immersion of larvae. Larvae were obtained from 30 engorged females of Riphicephalus (Boophilus) microplus were collected in a ranch in Lages, Santa Catarina state, Brazil. Larvae were obtained from 10mg of eggs placed into 5ml disposable syringes, previously prepared and kept under controlled conditions of laboratory, and collected between the third and the twelfth day of oviposition. Seven to ten days old larvae were submitted to the acaricide laboratory test, in ten replications, by their immersion in eight dilutions of commercial acaricides (amitraz or cypermethrin), for 30 seconds; for each replication and commercial product, a control group was immersed in distilled water. Results were evaluated 24 hours after each treatment by counting the number of live and dead larvae. The mean LD50 values and standard error of the mean for cypermethrin and amitraz were 2.99 ± 0.36 and 17.22 ± 4.20 ppm, respectively, for a confidence interval of 95 percent. The proposed acaricide laboratory test procedures by larvae immersion offered promising results for the evaluation of acaricides.

Objetivou-se desenvolver uma técnica de avaliação de carrapaticidas por imersão de larvas de Riphicephalus (Boophilus) microplus. As larvas foram obtidas a partir de ovos de 30 teleóginas coletadas em bovinos de uma propriedade rural do município de Lages, SC, Brasil, os quais foram acondicionados em alíquotas de 10mg por seringa descartável de 5ml, previamente preparadas e mantidas em câmara climatizada até a eclosão. Larvas com sete a dez dias de idade foram submetidas à imersão por 30 segundos em oito diluições de produtos carrapaticidas comerciais à base de amitraz e de cipermetrina, cada uma com dez repetições, sendo mantido um grupo controle para cada repetição e produto, o qual foi imerso em água destilada. A leitura foi realizada 24 horas após o tratamento com a contagem de larvas vivas e mortas. A média de DL50 para cipermetrina foi de 2,99ppm e o erro padrão de 0,36 e para o amitraz foi de 17,22ppm e o erro padrão de 4,20, com intervalo de confiança (IC) 95 por cento.